Ihe kacha adịkarị mfe maka ọdịda na ngwọta HPLC

Dị ka a elu-nkenke ngwá, HPLC nwere ike mfe iduga ụfọdụ nsogbu obere nsogbu ma ọ bụrụ na ọ na-adịghị arụ ọrụ n'ụzọ ziri ezi n'oge ojiji.Otu n'ime nsogbu ndị a na-ahụkarị bụ nsogbu mkpakọ kọlụm.Otu esi edozi nsogbu chromatograph na-ezighi ezi ngwa ngwa.Usoro HPLC na-enwekarị karama mmiri mmiri, mgbapụta mmiri, ihe injector, kọlụm, ụlọ okpomọkụ kọlụm, ihe nchọpụta na usoro nhazi data.Maka usoro dum, ogidi, nfuli na ndị na-achọpụta ihe bụ isi ihe na ebe ndị bụ isi na-enwe nsogbu.

Isi ihe na nrụgide kọlụm bụ mpaghara chọrọ nlebara anya nke ọma mgbe ị na-eji HPLC.Nkwụsi ike nke nrụgide kọlụm nwere njikọ chiri anya na ọdịdị elu chromatographic, arụmọrụ kọlụm, nrụpụta nkewa na oge njide.Nkwụsi ike nke kọlụm apụtaghị na uru nrụgide ahụ kwụsiri ike na uru kwụsiri ike, kama na mgbanwe mgbanwe mgbanwe dị n'etiti 345kPa ma ọ bụ 50PSI (na-enye ohere maka iji gradient elution mgbe nrụgide kọlụm kwụsiri ike ma jiri nwayọọ nwayọọ na-agbanwe).Nnukwu nrụgide ma ọ bụ dị ala bụ nsogbu nrụgide kọlụm.

Ihe kacha adịkarị mfe maka ọdịda na ngwọta HPLC

1, nrụgide dị elu bụ nsogbu kachasị na ojiji nke HPLC.Nke a pụtara ịrị elu nrụgide na mberede.N'ozuzu, e nwere ihe ndị a: (1) N'ozuzu, nke a bụ n'ihi nkwụsị ọwa mmiri.N'ebe a, anyị kwesịrị inyocha ya nkenke.a.Nke mbụ, bepụ ụzọ mbata nke mgbapụta agụụ.N'ebe a, PEEK tube jupụtara na mmiri mmiri nke mere na tube PEEK dị ntakịrị karịa karama ihe mgbaze iji hụ ma mmiri mmiri na-asọpụta ma ọ masịrị ya.Ọ bụrụ na mmiri mmiri anaghị agbapụta ma ọ bụ na-agbapụta nwayọ, a na-egbochi isi nzacha ihe mgbaze.Ọgwụgwọ: gbanye na 30% nitric acid maka ọkara otu awa wee kpochaa ya na mmiri ultrapure.Ọ bụrụ na mmiri mmiri na-atapụ na-akpaghị aka, isi nzacha ihe mgbaze bụ ihe nkịtị ma a na-enyocha ya;b.Mepee valvụ Purge ka usoro mkpanaka ahụ ghara ịgafe na kọlụm, ma ọ bụrụ na nrụgide adịghị ebelata nke ukwuu, a na-egbochi isi ọcha nzacha.Ọgwụgwọ: E wepụrụ isi ọcha ndị a kpochara ma were 10% isopropanol soniced maka ọkara otu awa.Na-eche na nrụgide ahụ na-adaba n'okpuru 100PSI, isi ọcha a na-ehichapụ bụ ihe nkịtị ma na-enyocha ya;c.Wepu njedebe ọpụpụ nke kọlụm, ma ọ bụrụ na nrụgide adịghị ebelata, a na-egbochi kọlụm.Ọgwụgwọ: Ọ bụrụ na ọ bụ ihe mgbochi nnu, kpochaa 95% ruo mgbe nrụgide dị mma.Ọ bụrụ na ihe ndị ọzọ echekwara nke ukwuu kpatara ihe mgbochi ahụ, a ga-eji ọsọ siri ike karịa usoro mkpanaka ugbu a iji mee ọsọ ọsọ gaa na nrụgide nkịtị.Ọ bụrụ na nrụgide ihicha ogologo oge adịghị ebelata dị ka usoro a dị n'elu, ntinye na ntinye nke kọlụm nwere ike weere na ejikọrọ na ngwá ọrụ n'ụzọ megidere ya, na kọlụm nwere ike ihicha ya na mkpanaka mkpanaka.N'oge a, ọ bụrụ na nrụgide kọlụm ka na-ebelata, a ga-eji dochie efere sieve nke kọlụm, ma ozugbo ọrụ ahụ adịghị mma, ọ dị mfe iduga na mbelata mmetụta kọlụm, ya mere gbalịa iji obere ihe.Maka nsogbu ndị siri ike, enwere ike ịtụle nnọchi kọlụm.

(2) Ntọala ọnụego nrịba na-ezighi ezi: Enwere ike ịtọgharịa ọnụego mgbaba ziri ezi.

(3) Na-ezighị ezi eruba ruru: viscosity index nke dị iche iche n'ike-n'ike nke eruba dị iche iche, na kwekọrọ ekwekọ usoro nrụgide nke eruba na elu viscosity bụkwa ibu.Ọ bụrụ na ọ ga-ekwe omume, enwere ike dochie ihe mgbaze viscosity dị ala ma ọ bụ degharịa ma dozie ya.

(4) Sistemụ nrụgide efu efu: gbanwee efu nke ihe mmetụta ọkwa mmiri mmiri.

2, nrụgide dị oke ala (1) na-emekarị site na ntapu sistemu.Ihe ị ga-eme: Chọta njikọ nke ọ bụla, ọkachasị interface dị na nsọtụ abụọ nke kọlụm ahụ, wee mee ka ebe nkwụsị ahụ sie ike.Wepu akwụkwọ ozi ahụ wee sie ike ma ọ bụ kwụchie ihe nkiri PTFE na ike kwesịrị ekwesị.

(2) gas na-abanye na mgbapụta ahụ, ma nrụgide na-adịkarịghị eguzosi ike n'ihe n'oge a, elu na ala.Nke ka njọ, mgbapụta ahụ agaghị enwe ike ịmịnye mmiri ahụ.Usoro ọgwụgwọ: mepee valvụ nhicha ma dị ọcha na ọnụego erute nke 3 ~ 5ml / min.Ọ bụrụ na ọ bụghị, a na-eji tube agịga raara onwe ya nye afụ ikuku na valvụ iyuzucha.

(3) Ọ dịghị mkpagharị na-apụ apụ: lelee ma enwere usoro mkpanaka na karama mmiri mmiri, ma mmiri mmiri na-emikpu n'ime usoro mkpanaka, yana ma mgbapụta na-agba ọsọ.

(4) A naghị emechi valvụ ntụaka: a na-emechi valvụ ntụaka mgbe emechara ya.Ọ na-agbadakarị ruo 0.1.~ 0.2mL / min mgbe emechiri valvụ ntụaka.

Nchịkọta:

N'akwụkwọ a, a na-enyocha naanị nsogbu ndị a na-ahụkarị na chromatography mmiri mmiri.N'ezie, na ngwa anyị bara uru, anyị ga-ezute ọtụtụ nsogbu ndị ọzọ.Na njikwa mmejọ, anyị kwesịrị ịgbaso ụkpụrụ ndị a: naanị gbanwee otu ihe n'otu oge iji chọpụta njikọ dị n'etiti ihe echiche na nsogbu ahụ;N'ozuzu, mgbe a na-edochi akụkụ maka nchọpụta nsogbu, anyị kwesịrị ịṅa ntị n'itinye akụkụ ndị ahụ emebighị emebi azụ iji gbochie ihe mkpofu;Ịmepụta àgwà ndekọ dị mma bụ isi ihe na-eme ka ihe ịga nke ọma nke njikwa mmejọ.N'ikpeazụ, mgbe ị na-eji HPLC, ọ dị mkpa ịṅa ntị na nlele pretreatment na ọrụ kwesịrị ekwesị na nhazi nke akụrụngwa.